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繁殖季节喜掘穴。洞穴位于池塘水面以上20厘米左右，深度达60厘米到1.2米，内有少量积水，以保持湿度，洞口一般以泥帽封住，以减少水分散失。
小龙虾常年均可繁殖，其中以5-9月为高峰期。小龙虾雌雄异体，并且具有较显著的第二性征。可从腹部游泳肢形状加以区分，雄虾腹部游泳肢特化为交合刺，而雌虾游泳肢特化为纳精孔；其次，二者螯足具明显差别，雄性螯足粗大，螯足两端外侧有一明亮的红色疣状突起，而雌虾螯足比较小，疣状突起不明显；第三，雄虾螯足较雌虾粗大，个体也大于雌虾。
小龙虾的卵巢发育持续时间较长，通常在交配以后，视水温不同，卵巢需再发育2-5个月方可成熟。在生产上，可从头胸甲与腹部的连接处进行观察，根据卵巢的颜色判断性腺成熟程度，把卵巢发育分为苍白、黄色、橙色、棕色（茶色）和深棕色（豆沙色）等阶段。其中苍白色是未成熟幼虾的性腺，细小，需数月方可达到成熟；橙色是基本成熟的卵巢，交配后需3个月左右可以排卵；茶色和棕黑色是成熟的卵巢，是选育亲虾的理想类型。精巢较小，在养殖池塘中，一般同卵巢同步成熟。在美国各主要的螯虾生产区域，一般采用逐步排干池水的方法，来刺激螯虾的性腺成熟，促进亲虾交配产卵。
